В учебнике обобщены основные современные приемы и методы работы с носителями генетической информации микроорганизмов - молекулами ДНК и РНК, выделяемыми из экспериментальных образцов при биохимических, молекулярно-биологических, генно-инженерных и экологических исследованиях в микробиологии.

Предисловие
Раздел I
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ПРИ
РАБОТЕ С ЧИСТЫМИ (АКСЕНИЧЕСКИМИ)
КУЛЬТУРАМИ МИКРООРГАНИЗМОВ
Глава I. Выделение нуклеиновых кислот из клеток
микроорганизмов (А.Л. Брюханов)
1.1. Выделение хромосомной ДН К
1.2. Выделение плазмидной ДНК
1.3. Выделение тотальной РНК
1.4. Количественное определение
нуклеиновых кислот
Глава 2. Полимеразная цепная реакция (А.Л.
Брюханов)
2.1. Амплификация фрагментов ДНК с
помощью ПЦР
2.2. ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ГЩР)
2.3. Полимеразная цепная реакция в реальном
времени
Глава 3. Гель-электрофорез нуклеиновых кислот
(А.Л. Брюханов).
3.1. Электрофорез ДНК и РНК в агарозном геле
3.2. Выделение нуклеиновых кислот из
агарозного геля
3.3. Электрофорез ДНК в полиакриламидном
геле
Глава 4. Трансформация клеток микроорганизмов
плазмидной ДНК (А.Л. Брюханов)
4.1. Получение химически-компетентных
клеток и трансформация.
4.2. Получение электрокомпетентных клеток и
электропорация
Глава 5. Перенос генетической информации у
бактерий с помощью фаговой транедукции и
конъюгации (КВ. Рыбак, А.Л. Брюханов)
5.1. Генетический перенос с помощью фаговой
транедукции
5.2. Генетический перенос посредством
конъюгации
Глава 6. Трансфекция клеток микроорганизмов
фаговой ДНК (К.В. Рыбак)
Глава 7. Молекулярное клонирование (К.В. Рыбак,
А.Л. Брюханов)
1.1. Клонирование фрагмента ДНК в составе
плазмидных векторов
7.1. Создание геномных библиотек
7.2. Гетерологичная экспрессия генов в
клетках Е. coli
7.3. Электрофоретическое разделение белков
в денатурирующем ДСН-полиакриламидном геле
Глава 8. Мутагенез (А". В. Рыбак, А.Л. Брюханов)
8.1. Мутагенез с помощью химических агентов
8.2. Получение серийных делеций
8.3. Сайт-направленный мутагенез
8.4. Модификация бактериальных хромосом с
помощью фаговых систем рекомбинаци
Глава 9. Мечение нуклеиновых кислот (А.Л.
Брюханов, К.В. Рыбак)
9.1. Радиоактивное мечение нуклеиновых
кислот
9.2. Нерадиоактивное мечение нуклеиновых
кислот
Глава 10. Гибридизация нуклеиновых кислот (А.Л.
Брюханов, К.В. Рыбак)
10.1. ДНК-ДНК гибридизация
10.2. РНК-ДНК гибридизация
Глава 11. Секвенирование ДНК (А.Л. Брюханов)
Раздел II
МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ПРИ
РАБОТЕ СО СМЕШАННЫМИ КУЛЬТУРАМИ
МИКРООРГАНИЗМОВ
Глава 12. Экстракция нуклеиновых кислот (ДНК и
РНК) из природных образцов (A.M. Нетрусов)
12.1. Прямая экстракция ДНК
12.2. Прямая экстракция РНК
Глава 13. T/DGGE-методы для анализа микробных
сообществ (A.M. Нетрусов)
13.1. Принципы разделения молекул на примере
денатурирующего градиентного
гель-электрофореза (ДГГЭ)
13.2. Метод проведения термального
градиентного гель-электрофореза (ТГГЭ)
13.3. Проведение электроблоттинга
денатурирующих градиентных гелей и
гибридизационный анализ профилей ДГГЭ с
олигонуклеотидными зондами
13.4. Экстракция ДНК из денатурирующих
градиентных гелей
Глава 14. Метод T-RFLP для анализа динамики
сложных микробных сообществ (A.M. Нетрусов)
Глава 15. Флуоресцентная гибридизация in situ как
метод обнаружения и идентификации микробных
клеток (A.M. Нетрусов, А.Л. Брюханов)
15.1. Выполнение процедуры стандартной
флуоресцентной гибридизации in situ
15.2. Флуоресцентная гибридизация in situ с
использованием тирамидной амплификации сигнала
(CARD-FISH)
Приложения
Приложение 1. Приготовление питательных сред и
растворов (А.Л. Брюханов, К.В. Рыба
Приложение 2. Некоторые штаммы Escherichia coli,
наиболее часто применяемые в
молекулярно-биологических исследованиях (А.Л.
Брюханов)
Приложение 3. Молекулярно-биологические базы
данных и другие интернет-ресурсы (А.Л.
Брюханов)
Приложение 4. Некоторые компании - поставщики
химических реактивов, препаратов и оборудования
(А.Л. Брюханов)
Предметный указатель