Предисловие к русскому изданию......10 Предисловие......12 Сокращения......14 1. Введение......16 2. Номенклатура ферментов......19 3. Ферментативные реакции......22 3.1 Теория ферментативной реакции......22 3.1.1 Порядок реакции......22 3.2 Уравнение Михаэлиса–Ментен......25 3.3 Теория ферментативного анализа......33 3.3.1 Анализ кинетической кривой......33 3.3.2 Проведение ферментативного анализа......39 3.3.3 Активность фермента......49 3.4 Теория сопряженных ферментативных реакций......55 3.4.1 Две сопряженные реакции......55 3.4.2 Три сопряженные реакции......59 3.5 Определение концентрации субстрата......59 3.5.1 Метод конечной точки......59 3.5.2 Сопряженные ферментативные реакции......62 3.5.3 Кинетический метод определения концентрации субстрата......62 3.5.4 Циклические ферментативные процессы......63 3.6 Методы ферментативного анализа......65 3.6.1 Спектральные методы......66 3.6.2 Электрохимические методы......82 3.6.3 Реакции
протекающие с выделением или поглощением газа......85 3.7 Ферментативный анализ......87 3.7.1 Общие замечания......87 3.7.2 Практические аспекты......91 3.7.3 Буферы и растворы......92 3.7.4 Определение оксидоредуктаз......99 3.7.5 Пируватдегидрогеназный комплекс (ПДГК)......120 3.7.6 α-Оксоглутаратдегидрогеназный комплекс (ОГДГК)......130 3.7.7 Трансферазы......132 3.7.8 Гидролазы......139 3.7.9 Протеазы......154 3.7.10 Лиазы......167 3.7.11 Изомеразы......171 3.7.12 Определение концентрации никотинамидных нуклеотидов с помощью сопряженных ферментативных реакций......175 3.8 Различные методы......179 3.8.1 Определение концентрации белков......179 3.8.2 Определение концентрации фосфата......194 3.8.3 Концентрирование растворов ферментов......195 3.9 Иммуноферментный анализ......203 3.9.1 Неконкурентный твердофазный иммуноферментный анализ......204 3.9.2 Конкурентный твердофазный иммуноферментный анализ......205 3.9.3 Методы иммуноферментного анализа и способы иммобилизации......206 4. Изучение связывания......213 4.1 Необратимое
обратимое
специфическое и неспецифическое связывание......213 4.1.1 Общие замечания......213 4.1.2 Экспериментальные аспекты......216 4.2 Анализ связывания с помощью определения размеров частиц......219 4.2.1 Ультрафильтрация......220 4.2.2 Равновесный диализ......221 4.2.3 Обработка результатов эксперимента по изучению связывания......227 4.2.4 Гель-фильтрация......230 4.2.5 Ультрацентрифугирование......232 4.3 Спектральные методы......234 4.3.1 Дифференциальная спектроскопия......235 4.3.2 Флуоресцентная спектроскопия......247 4.4 Другие методы анализа связывания......255 4.4.1 Радиоактивная метка......255 4.4.2 Отражательная интерференционная спектроскопия......256 5. Применение ферментов в технологических процессах......257 5.1 Принципы иммобилизации ферментов......258 5.1.1 Адсорбция......259 5.1.2 Включение в пористую матрицу......260 5.1.3 Капсулирование......261 5.1.4 Образование перекрестных сшивок......262 5.1.5 Ковалентное связывание на твердом носителе......264 5.2 Методы иммобилизации ферментов......266 5.2.1 Микрокапсулирование в нейлоновые шарики......267 5.2.2 Включение в полиакриламидный гель......267 5.2.3 Ковалентная иммобилизация фермента на поверхности непористого стекла......269 5.2.4 Иммобилизация на стекле с контролируемым размером пор......272 5.2.5 Ковалентная иммобилизация на полиамидной матрице......274 5.2.6 О-Алкилирование с помощью тетрафторбората триэтилоксония......275 5.2.7 Связывание фермента с аминогруппами после частичного гидролиза полиамида......278 5.2.8 Связывание фермента с карбоксильными группами после частичного гидролиза полиамида......281 5.2.9 Иммобилизация фермента на полиэфирной матрице......281 5.2.10 Иммобилизация с помощью щелочного гидролиза и активации тозилхлоридом......284 5.2.11 Щелочной гидролиз и активация карбонилдиимидазолом......285 5.3 Методы анализа иммобилизованных ферментов......286 5.3.1 Определение концентрации белка......286 5.3.2 Определение ферментативной активности......287 5.4 Биореакторы......290 5.4.1 Реактор периодического действия......292 5.4.2 Мембранный реактор......292 5.4.3 Реактор с неподвижным слоем......293 5.4.4 Иммобилизованные клетки......294 5.5 Биосенсоры......294 5.5.1 Ферментные электроды......294 5.5.2 Иммунные сенсоры......300 5.5.3 Другие типы биосенсоров......301 5.5.4 Биоаффинные сенсоры......302 5.6 Иммобилизованные ферменты в медицине......302 Приложение......304 Список ферментов в соответствии с их международной классификацией (КФ)......304 Предметный указатель......322